阿霉素（Adria mycin，ADM或Doxovubicin ，DOX）又称多柔比星，是一类在临床上广泛使用的具有光谱高效抗癌活性的薏环类抗生素[1]，在多种癌瘤的化疗方案中可见到阿霉素，如治疗白血病、乳腺癌、肺癌及恶性淋巴瘤等的方案中。目前，人们对ADM的抗癌机制报道很多，但关于ADM对基因表达的影响很少报告。为探讨ADM对谷胱甘肽s转移酶π（GSTπ）表达的影响，我们利用细胞培养和S?P免疫组化的技术，观察了ADM对人胃癌BGC?823细胞株GSTπ表达的影响，为深入认识ADM的作用途径和癌细胞耐药机制提供参考依据。
    1  材料与方法
    1.1  材料  AMD由深圳市万乐药业有限公司生产，BGC?823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。S?P免疫组织化学试剂盒及鼠抗人单克隆抗体GSTπ、DAB显色剂由中杉金桥生物技术有限公司提供。
    1.2  方法  将5×104个cell/mL浓度的BCG?823胃癌细胞，装入无菌96孔板中，置37℃ 5%CO2培养箱中培养24h，细胞贴壁爬片(盖玻片)，对照组不加AMD培养,实验组加入ADM注射液15μL(含AMD 0.0015mg)，然后继续培养5h或10h,取出贴壁细胞,4%多聚甲醛固定30min,然后用PBS(pH7.2)清洗,其中一片滴Ⅰ抗,室温过夜,常规S?P法,Ⅱ抗、Ⅲ抗分别37℃孵育30min。阴性对照PBS代替I抗，阳性对照用已知胃癌阳性切片。
    1.3  统计学处理  利用彩色图象分析系统，每组计数50个阳性细胞检测其着色灰度，以灰度表示着色深浅（深者即含量高者灰度值低，浅者灰度值高说明含量越低）。通过SPSS软件分析，计算方差值，再进行独立样本t检验。
    2  结果
    2.1  HE染色后光镜下观察，可见对照组BGC?823细胞呈梭形、多边形；胞核圆形呈紫兰色，边界清晰，核仁可见，胞质均匀，多呈弱嗜酸性，实验组5h组823癌细胞的胞质突消失，菱形细胞减少，很多细胞周边多呈毛刺状，胞质空泡增多；胞核多呈固缩状态，着色较深，实验10h组，大部分癌细胞胞质消失，少部分癌细胞胞质水肿，HE染色时胞核固缩。
    2.2  免疫组化结果
    表1  阿霉素对胃癌细胞GSTπ表达的影响 （灰度值）注：*与对照组和10h组比较有显著性差异（P<0.01）
    3  讨论
    阿霉素是一种广谱、高效的抗肿瘤抗生素，在多种肿瘤的化学治疗中占有重要的地位。关于阿霉素的药理作用机制，目前主要有两种观点：一种观点认为ADM直接与DNA相互作用（即经典的嵌入结合）而导致对DNA复制及转录过程的抑制[2]；另一种观点认为ADM可诱导氧自由基的形成，从而导致对核酸的切割[3]。近有学者采用DNA修饰的金电极表面电化学方法对AMD与DNA相互作用进行了研究[4]，结果发现，在酸性溶液中，AMD带正电荷，dsDNA带负电荷，两者之间的相互作用主要是静电结合，随着pH值的增加，在中性溶液中，AMD与dsDNA的相互作用是嵌入结合。BGC?823细胞突起消失，胞质中空泡增多，可能与AMD与癌细胞中的DNA作用所致。